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本試劑盒只能用于科學研究,  不得用于醫學診斷

土壤 (soil)  β-1 ,4-葡萄糖苷酶 (β-G)  ELSA檢測試劑 盒

使用說明書

檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往 預先包被β-1,4-葡萄糖苷酶  (β-G） 抗體的包被微孔中 ，依次加入標 本 、標準品 、HRP標記的檢測抗體 ，經過溫育并徹底洗滌 。用底物 TMB顯色 ，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色 ，并在酸的作用 下轉化成最終的黃色 。顏色的深淺和樣品中的β-1,4-葡萄糖苷酶  (β -G）呈正相關 。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計 算樣品活性 。

樣品收集 、處理及保存方法

1.   樣本不能含疊氮鈉（NaN3）， 因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧 化物酶（HRP） 的抑制劑 。

2.   標本采集后盡早進行提取 ，提取按相關文獻進行 。

3.   植物萃取液或其它相關樣本：請1000 x g離心20分鐘，取上清即 可檢測 。

4.   保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于

-20℃ ,  避免反復凍融 ，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍 。

自備物品

1.  酶標儀（450nm）

2.   高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL 、2-20uL 、20-200uL 、200-1000uL

3.   37℃恒溫箱

操作注意事項

1.   試劑盒保存在 2-8℃ ,   使用前室溫平衡 20 分鐘 。從冰箱取出的 濃縮洗滌液會有結晶 ，這屬于正?，F象 ，水浴加熱使結晶完全溶解 后再使用 。

2.   實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存 。

3.   濃度為 0 的 S0 號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明 書操作時樣本已經稀釋5 倍 ，最終結果乘以 5 才是樣本實際濃度 。

4.   嚴格按照說明書中標明的時間 、加液量及順序進行溫育操作 。

5.   所有液體組分使用前充分搖勻 。

試劑盒組成

注 ：標準品（S0-S5）濃度依次為 ：0 、2.5 、5 、10 、20 、40 U/mL

試劑的準備

20×洗滌緩沖液的稀釋 ：蒸餾水按 1： 20 稀釋， 即 1 份的 20×洗滌 緩沖液加 19 份的蒸餾水 。

洗板方法

1.   手工洗板：甩盡孔內液體 ，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡

孔內液體 ，在吸水紙上拍干 ，如此洗板 5 次 。

2.    自動洗板機 ：每孔注入洗液 350μL ，浸泡 1min ，洗板 5 次 。

操作步驟

1.   從室溫平衡 20min后的鋁箔袋中取出所需板條 ，剩余板條用自 封袋密封放回 4℃ 。

2.   設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL； 3.   樣本孔先加待測樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL；空白孔不加 。 4.   除空白孔外 ，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶   （HRP） 標記的檢測抗體 100μL， 用封板膜封住反應孔， 37℃水浴  鍋或恒溫箱溫育 60min 。

5.   棄去液體， 吸水紙上拍干 ，每孔加滿洗滌液 ，靜置 1min ，甩去 洗滌液， 吸水紙上拍干 ，如此重復洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。

6.   每孔加入底物 A 、B 各 50μL ，37℃避光孵育 15min 。

7.   每孔加入終止液 50μL，15min 內，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值 。

試劑盒性能

1.   準確性 ：標準品線性回歸與預期濃度相關系數 R 值， 大于等于 0.9900 。

2.  靈敏度 ：最低檢測濃度小于 1.0 U/mL 。

3.  特異性： 不與其它可溶性結構類似物交叉反應 。

4.  重復性 ：板內 、板間變異系數均小于 15% 。

5.  貯藏 ：2-8℃ ,  避光防潮保存 。

6.  有效期： 6 個月

免責聲明

1.    試劑盒僅供研究使用， 不得用于臨床實驗或人體實驗， 否則所 產生的一切后果， 由實驗者承擔 ，本公司概不負責 。

2.    嚴格按照說明書操作， 實驗者違反說明書操作 ，后果由實驗者 承擔 。

格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者 承擔。