組織鐵含量檢測試劑盒說明書  微量法

規 格：100T/96S

產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系工作人員。

溶液的配制：

1、 試劑一：臨用前配制，加入 5 mL 蒸餾水充分溶解，試劑一變黑后則不能使用；

2、 試劑二：臨用前配制，加入 235 μL 冰醋酸，加入 7.5 mL 蒸餾水充分溶解；溶解后 4℃保存一周；

3、 標準液：1 μmol/mL Fe3+標準液。臨用前稀釋 8 倍即 0.125 μmol/mL 的標準溶液進行實驗，現用現配。

產品說明：

鐵是人體必須的微量元素之一，它是血紅蛋白、肌紅蛋白、細胞色素及其他酶系統的主要成分，幫助氧的運輸，促進脂肪氧化。缺乏鐵元素容易造成貧血、代謝紛亂，并影響機體的免疫功能。

亞硫酸鈉還原Fe3+生成Fe2+，Fe2+進一步與2, 2’-聯吡啶顯色，在520nm處有吸收峰，測定該波長吸光度即可計算鐵含量。

技術指標：

最低檢出限：0.00206 μmol/mL

線性范圍：0.0039-0.25 μmol/mL

注意：實驗之前建議選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、低溫離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、氯仿、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。4000g 4℃離心 10 分鐘，取上清。

二、測定步驟

1. 可見分光光度計/酶標儀預熱30min，波長調至520nm。蒸餾水調零。

加樣表：

三、組織鐵含量計算

1．按組織質量計算：

組織鐵含量（μg/g 質量）=（C標準液×ΔA測定÷ΔA標準）×V提取×55.845÷W= 6.98×ΔA測定÷ΔA標準÷W 2．按組織蛋白濃度計算

組織鐵含量（μg/mg prot）=（C標準液×ΔA測定÷ΔA標準）×V提取×55.845÷（Cpr×V提取）

= 6.98×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr

C標準液：0.125μmol/mL Fe3+標準液；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；V提取：提取液體積，1mL；55.845： Fe的相對分子質量，55.845μg/μmol。

注意事項：

1、 當ΔA大于0.6 時，建議將樣本用提取液稀釋后進行測定。

2、 試劑一溶解變黑后則不能使用；試劑二有毒性，做好防護措施。