產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：液體 20mL×1 瓶，4℃保存（強(qiáng)腐蝕性，強(qiáng)氧化性）。

試劑二：液體 7mL×1 瓶，4℃保存。

   試劑三：粉劑×2 瓶，4℃避光保存。臨用前配制，加入 5mL 蒸餾水，溶解后再加入 2.5mL 試劑二，混勻。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1mL×1 支，1mmol/L 無(wú)機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。

產(chǎn)品說(shuō)明：

磷的存在形態(tài)包括無(wú)機(jī)磷與有機(jī)磷。無(wú)機(jī)磷主要指磷酸根，參與生物體內(nèi)多種代謝，包括能量代謝、核酸代謝、蛋白質(zhì)磷酸化和脫磷酸化等。通過(guò)測(cè)定總磷與無(wú)機(jī)磷含量即可了解作物對(duì)磷的利用率，進(jìn)而為合理施肥提供依據(jù)。

總磷經(jīng)消化后，轉(zhuǎn)化成無(wú)機(jī)磷。鉬藍(lán)法是測(cè)定無(wú)機(jī)磷含量的經(jīng)典方法，一定條件下，鉬藍(lán)與磷酸根生成 660nm 有特征吸收峰的物質(zhì)，通過(guò)測(cè)定 660nm 光吸收，即可計(jì)算無(wú)機(jī)磷含量，進(jìn)而可計(jì)算出組織中總磷含量。

自備儀器和用品：

離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、蒸餾水和濃硫酸。

操作步驟：

一、有機(jī)磷消化：

取帶蓋試管，加入精確稱取的約 0.1g 組織，加濃硫酸 1 mL，蓋緊（防止水分散失）后沸水浴10min 左右，待溶液呈黑色或棕色時(shí)取出。稍冷后，加試劑一 200μL，充分混勻，蓋緊后繼續(xù)沸水浴，直到溶液呈透明狀，取出室溫冷卻后，加蒸餾水 3.8 mL，充分混勻；室溫，10000rpm，離心10min，取上清液，待測(cè)。

二、測(cè)定：

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 660 nm，蒸餾水調(diào)零。

2.打開(kāi)水浴鍋，調(diào)節(jié)溫度到 40℃。

3.測(cè)定：

混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測(cè)定吸光度，分別記為 A 空白

管、A 標(biāo)準(zhǔn)管、A 測(cè)定管。三、組織總磷含量計(jì)算：

總磷含量(mmol /g FW)= [C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測(cè)定－A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)－A 空白)]×V 總÷W

=0.005×(A 測(cè)定－A 空白)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)－A 空白)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)液：1 mmol/L；V 總：上清液總體積，5 mL=0.005 L。W：樣品質(zhì)量，g。

注意事項(xiàng)：

1、試劑三需臨用前配制，限當(dāng)天使用。

2、測(cè)定前先用 1~2 個(gè)樣品做預(yù)實(shí)驗(yàn)，如吸光值大于 1 時(shí)，需用蒸餾水做相應(yīng)稀釋。