葡萄糖氧化酶活性檢測試劑盒說明書微量法

注意：正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。

貨號：4531

規格：100T/96S

產品內容：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存； 試劑一：液體 15mL×1 瓶，4℃保存； 試劑二：液體 3mL×1 瓶，4℃保存；

試劑三：液體 1mL×1 支，-20℃保存，融化后可分裝保存。

產品說明：

GOD（EC 1.1.3.4）廣泛存在于動物和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并產生 H₂O₂， 是生物體中產生活性氧的代謝途徑之一。

GOD 催化葡萄糖產生 H₂O₂，過氧化物酶在有氧存在時催化 H₂O₂ 分解產生的氧又將鄰聯茴香胺氧化生成有色物質，顏色深淺與葡萄糖氧化酶活性成線性關系。

試驗中所需的儀器和設備：

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水

操作步驟：

一、樣品測定的準備

1、組織處理：稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿；8000g 4℃離心 10min，取上清， 置冰上待測。

2、血清（漿）：直接檢測。二、測定步驟

1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 500nm，蒸餾水調零。

2、GOD 工作液的配制：取 15mL 試劑一加 3mL 試劑二混勻，調 PH 至 5.1（現配現用）。

3、加樣表：

樣品測定前將 GOD 工作液與試劑三放入 37℃水浴中保溫，然后將上述試劑按順序加入微量比色皿/96 孔板中，加樣本的同時開始計時；在 500 nm 波長下記錄 20 秒時的初始吸光度 A1 及 1 分20 秒時的吸光度 A2。計算ΔA=A2-A1。

三、GOD 活力單位的計算

a. 用微量玻璃比色皿測定的計算公式如下

1、動物組織 GOD 活力的計算

（1） 按蛋白濃度計算

單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘催化產生 1μmol  氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。

GOD（U/mg prot）=ΔA÷(ε×d)×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T=1333×ΔA÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計算

單位的定義：每 g 組織在反應體系中每分鐘催化產生 1μmol 氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。

GOD（U/g 鮮重）=ΔA÷(ε×d)×V 反總÷(W÷V 提取×V 樣)÷T=1333×ΔA÷W

2、血清（漿）GOD 活力的計算

單位的定義：每 mL 血清（漿）在反應體系中每分鐘催化產生 1μmol  氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。

GOD（U/mL）=ΔA÷(ε×d)×V 反總÷T÷V 樣本=1333×ΔA

V 反總：反應總體積，0.2mL；V 樣本：加入樣本體積，0.02mL；V 提取，加入提取液體積， 1mL；cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；d：光徑，1cm；ε：氧化型鄰聯茴香胺消光系數，7.5×10-3mL/μmol/cm；T：反應時間，1min。

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

1、動物組織 GOD 活力的計算

（1） 按蛋白濃度計算

單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘催化產生 1μmol  氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。

GOD（U/mg prot）=ΔA÷(ε×d)×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T=2222×ΔA÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計算

單位的定義：每 g 組織在反應體系中每分鐘催化產生 1μmol 氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。

GOD（U/g 鮮重）=ΔA÷(ε×d)×V 反總÷(W÷V 提取×V 樣)÷T=2222×ΔA÷W

2、血清（漿）GOD 活力的計算

單位的定義：每 mL 血清（漿）在反應體系中每分鐘催化產生 1μmol  氧化型鄰聯茴香胺定義為一個酶活力單位。

GOD（U/mL）=ΔA÷(ε×d)×V 反總÷T÷V 樣本=2222×ΔA

V 反總：反應總體積，0.2mL；V 樣本：加入樣本體積，0.02mL；cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL； W：樣本鮮重，g；d：光徑，0.6cm；ε：氧化型鄰聯茴香胺消光系數，7.5×10-3mL/μmol/cm；T：反應時間，1min。

注意事項：

1、不同勻漿組織中 GOD 活力不一樣，做正式試驗之前請做 1-2 只預試，若 A2-A1>1, 則說明組織活力太高，必須用提取液稀釋成適當濃度勻漿上清液，使 A2-A1<1，以提高檢測靈敏度。實驗過程中若出現 A1> A2 現象請將樣本用提取液稀釋成適當濃度.

2、最好兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結果的準確性。

3、此試劑盒僅適用于動物組織和動物血清（漿）。