BCA 蛋白濃度測定試劑盒
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產品簡介：
BCA 蛋白濃度測定試劑盒(BCA Protein Assay Kit)是根據目前世界上最常用的兩種蛋白濃度檢測 方法之一 BCA 法研制而成，實現了蛋白濃度測定的簡單， 高穩定性，高靈敏度和高兼容性。
產品特性：
1、靈敏度高：檢測濃度下限 25μg/ml，最小檢測蛋白量達到 0.5μg，待測樣體積為 1-20 μ l；
2、在 50-2000μg/ml 濃度范圍內有較好的線性關系。
3、BCA 法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響，可以兼容樣品中高達 5%的 SDS， 5%的 Triton X-100 ，5%的 Tween 20, 60, 80。但受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保 EDTA 低于 10mM，無 EGTA，二硫蘇糖醇低于 1mM，β-巰基乙醇低于 0.01%。
4、不適用 BCA 法時建議試用優選生產的 Bradford 蛋白濃度測定試劑盒。
包裝清單：
產品編號 產品名稱 包裝
說明書 1 份
保存條件：
BCA 試劑 A 和 B 室溫保存，蛋白標準請-20℃凍存。本試劑盒自訂購之日起一年內有效。
注意事項：
需酶標儀一臺，測定波長為 540-595nm 之間，562nm 最佳。需 96 孔板。如果沒有酶標儀，也 可以使用普通的分光光度計測定，但測定時，需根據比色皿的最小檢測體積，適當加大 BCA 工作液 的用量使不小于最小檢測體積，樣品和標準品的用量可相應按比例放大也可不變。
使用分光光度計測定蛋白濃度時，每個試劑盒可以測定的樣品數量可能會顯著減少。
為了加快 BCA 法測定蛋白濃度的速度可以適當用微波爐加熱，但是切勿過熱。
EDTA 濃度必須小于 10mM，不兼容 EGTA。
不適用 BCA 法時，請試用 Bradford 蛋白濃度測定試劑盒。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用說明：
1. 根據樣品數量，按 50 體積 BCA 試劑 A 加 1 體積 BCA 試劑 B(50:1)配制適量 BCA 工作液，充 分混勻。BCA 工作液室溫 24 小時內穩定。
2. 完全溶解蛋白標準品，取 10 μl 稀釋至 100μl，使終濃度為5mg/ml。蛋白樣品在什么溶 液中，標準品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見， 也可以用 0.9%NaCl 或 PBS 稀釋標準品。
3. 將標準品按 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20 μl 加到 96 孔板的標準品孔中， 加用于稀釋標準品的溶液 補足到 20 μl。
4. 加適當體積樣品到 96 孔板的樣品孔中，加用于稀釋標準品的溶液到 20 μl。
5. 各孔加入 200 μl BCA 工作液，37℃放置 30 分鐘。
注: 也可以室溫放置 2 小時，或 60℃放置 30 分鐘。BCA 法測定蛋白濃度時，吸光度會隨著時間的延長不斷 加深。并且顯色反應會因溫度升高而加快。如果濃度較低，適合在較高溫度孵育，或延長孵育時間。
6. 測定 A562 ，540-595nm 之間的波長也可接受。根據標準曲線計算出蛋白濃度
常見問題：
1. 測定標準曲線時發現隨著標準品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯變化。 可能的原因是樣品中含有嚴重干擾 BCA 法測定蛋白濃度的物質。
2. 是否每次測定時都需要做標準曲線？
建議每次測定時都做標準曲線。因為 BCA 法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，并 且顯色反應的速度和溫度有關，所以除非精確控制顯色反應的時間和溫度，否則如需精確測 定宜每次都做標準曲線。
使用本產品的文獻：
1. Mitochondrial dysfunction as an early event in the process of apoptosis induced by woodfordin I in human leukemia K562 cells. Liu MJ, Wang Z, Li HX, Wu RC, Liu YZ, Wu QY. Toxicol Appl Pharmacol.
2004 Jan 15;194(2):141-55.
2.Dual effects of cycloheximide on U937 apoptosis induced by its combination with VP-16. Wu RC, Chen DF, Liu MJ, Wang Z. Biol Pharm Bull. 2004 Jul;27(7):1075-80.
3. A protein delivery system: biodegradable alginate-chitosan-poly(lactic-co-glycolic acid) composite microspheres. Zheng CH, Gao JQ, Zhang YP, Liang WQ.Biochem Biophys Res Commun. 2004 Oct 29;323(4):1321-7.
4. β2-integrins mediate a novel form ofchemoresistance in cycloheximide-induced U937 apoptosis. R.-C. Wu, Z. Wang, M.-J. Liu, D.-F. Chen and X.-S. Yue.Cell. Mol. Life Sci. 2004,61(16):2071–2082.
